一、PCR實驗室(shi)的設計原則(ze)

標準的PCR實驗室一般分(fen)為4個(ge)區(qu)域(yu)：一區(qu)為試劑準備(bei)區(qu)，二區(qu)為標本制備(bei)區(qu)，三區(qu)為PCR擴(kuo)增區(qu)，四區(qu)為產物分(fen)析區(qu)。

為避免交叉(cha)污染，進入各(ge)個工作區(qu)(qu)(qu)域必(bi)須嚴格遵(zun)循單(dan)一方向進行，即只(zhi)能從試劑貯(zhu)存和(he)準備區(qu)(qu)(qu)→標本制(zhi)備區(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)增反應混合物(wu)配制(zhi)和(he)擴(kuo)增區(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)增產物(wu)分(fen)析區(qu)(qu)(qu)。各(ge)實驗區(qu)(qu)(qu)之間的試劑及樣品(pin)傳(chuan)遞應通過傳(chuan)遞窗進行。

二、PCR實驗(yan)室各分(fen)區(qu)介紹

2.1試劑準備區（1區）

該實驗區(qu)主(zhu)要(yao)進行的(de)(de)(de)操作(zuo)為貯存試(shi)劑的(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei)、試(shi)劑的(de)(de)(de)分裝(zhuang)和擴增(zeng)反應混合液的(de)(de)(de)制(zhi)(zhi)備(bei)。試(shi)劑和用于標本制(zhi)(zhi)作(zuo)的(de)(de)(de)材(cai)料(liao)應直接運(yun)送(song)至(zhi)該區(qu)，不(bu)得(de)經過其他區(qu)域。試(shi)劑原(yuan)材(cai)料(liao)必須貯存在本區(qu)內(nei)，并在本區(qu)內(nei)制(zhi)(zhi)備(bei)成所需的(de)(de)(de)貯存試(shi)劑。

房間的(de)面積宜控制在15㎡~20㎡。本(ben)區的(de)壓(ya)力梯(ti)度(du)要求(qiu)為:相對正壓(ya)狀態(tai)，以防(fang)止外界含核酸氣(qi)溶膠(jiao)的(de)空氣(qi)進入，造成污染。

2.2標本制備區（2區）

該區域主要進行(xing)的操作(zuo)為(wei)臨(lin)床(chuang)標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取(qu)、貯存及(ji)其加入至擴增反(fan)應管和測定RNA時cDNA的合成。

標本(ben)制備(bei)區的(de)(de)面積宜在(zai)25㎡~30㎡之間。本(ben)區的(de)(de)壓力梯度要(yao)求為：相(xiang)對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進入(ru)本(ben)區的(de)(de)氣溶膠污染(ran)。另外(wai)，由于在(zai)加樣操作中可(ke)能會發生氣溶膠所(suo)致的(de)(de)污染(ran)，所(suo)以應避免在(zai)本(ben)區內不必(bi)要(yao)的(de)(de)走動。

2.3 擴(kuo)增反應混(hun)合物配制和擴(kuo)增區（3區）

該(gai)區(qu)域主(zhu)要進行的(de)操作為(wei)DNA或cDNA擴增。此外，已(yi)制(zhi)備(bei)的(de)DNA模板和合(he)成的(de)cDNA(來自樣本制(zhi)備(bei)區(qu))的(de)加入和主(zhu)反應(ying)混合(he)液(來自試劑貯(zhu)存(cun)和制(zhi)備(bei)區(qu))制(zhi)備(bei)成反應(ying)混合(he)液等也可在本區(qu)內進行。

擴增室(shi)(shi)主要配(pei)備PCR實驗室(shi)(shi)的核心儀器PCR儀，在實驗室(shi)(shi)建造過程中，需要給PCR儀配(pei)備專門的UPS電源，以保證其(qi)正常(chang)工作。該(gai)區面(mian)積(ji)控(kong)制在15㎡~20㎡。

本(ben)區(qu)(qu)的(de)壓力梯度要(yao)求為(wei)：相對于(yu)鄰近區(qu)(qu)域為(wei)負壓，以避(bi)免氣(qi)溶膠(jiao)從本(ben)區(qu)(qu)漏出。為(wei)避(bi)免氣(qi)溶膠(jiao)所致的(de)污染，應盡量減少在(zai)(zai)本(ben)區(qu)(qu)內(nei)的(de)不必要(yao)的(de)走動。個(ge)別操作如加樣等應在(zai)(zai)超凈(jing)臺內(nei)進(jin)行(xing)。建議采用≥10Pa壓差(cha)，在(zai)(zai)控制(zhi)上(shang)比較(jiao)容(rong)易實現。

2.4 擴(kuo)增產物分析區（4區）

該(gai)區(qu)(qu)域(yu)主要進行(xing)的(de)(de)(de)操作(zuo)為擴增(zeng)(zeng)片段的(de)(de)(de)測定。本(ben)區(qu)(qu)是最主要的(de)(de)(de)擴增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)污染來源，因(yin)此對(dui)本(ben)區(qu)(qu)的(de)(de)(de)壓力梯度的(de)(de)(de)要求為：相對(dui)于鄰近區(qu)(qu)域(yu)為負壓，以避免(mian)擴增(zeng)(zeng)產(chan)物(wu)從本(ben)區(qu)(qu)擴散(san)至其它(ta)區(qu)(qu)域(yu)。

在室(shi)內配備(bei)通風櫥，保證房間內的相對負壓，空氣從室(shi)外(wai)流向室(shi)內。該區面積(ji)控(kong)制在15m2~20m2。

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